論文摘要:皂苷類成分在植物中分布廣泛、資源豐富,許多皂苷具有良好的抗腫瘤活性,并且在治療糖尿病方面具有驚人的功效。因此皂苷作為治療癌癥、糖尿病等疾病的藥物成分具有很大的研究價值。本文綜述了近年來國內外植物中皂苷類成分的檢測技術,以期為進一步提高皂苷類藥物的質量控制標準,更好的開發皂苷類藥物提供理論和技術參考。
論文關鍵詞:皂苷,檢測技術,質量控制
1前言
皂苷是固醇或三萜類化合物的低聚配糖體總稱,在薔薇科、石竹科、無患子科、百合科、玄參科、豆科等科的某些屬植物中分布較多。根據皂苷元的結構可將皂苷分為三萜皂苷和甾體皂苷兩大類。大量研究表明,皂苷在祛痰、止咳、鎮靜、解熱、抗菌、抗癌、調節機體代謝及免疫、治療心血管疾病和糖尿病等方面具有良好的功效。目前已經有人參皂苷、三七皂苷、絞股藍皂苷等中成藥和復方制劑生產上市,并且這類藥物在服用后有很好的效果。所以預計今后會有越來越多的皂苷類藥物被給予研究、生產。本文將近年來國內外對植物中皂苷類成分分析方法進行綜述,以期為提高皂苷生藥和制劑的質控標準,更好地開發和利用皂苷類生藥資源提供理論與技術參考。
2分析方法
2.1比色法
比色法是皂苷類成分分析測定中歷史較長、應用較普遍的方法。其原理是皂苷類成分和一些顯色試劑反應后顯色,可以在一定波長處進行測量。常用的顯色劑有:香草醛-高氯酸-冰醋酸、香草醛-高氯酸-80%磷酸、香草醛-70%硫酸水溶液等。這些顏色反應雖然靈敏,但是專屬性較差,所以比色法常用于總皂苷的測定。楊紅等用薄層層析-比色法測定降糖安膠囊中胡蘆巴皂苷B含量,采用硅膠H薄層板,氯仿:甲醇:醋酸:水(25:12:2:2)為展開劑,在碘蒸氣中定位,用高氯酸顯色,325nm波長處檢測。由于比色法所顯顏色隨顯色溫度和時間的變化而變化,因此比色法重現性差。采用此法時須嚴格控制使測定條件相同,盡量避免干擾。
2.2分光光度法
分光光度法其實是比色法的延伸。它不僅能測定有色物質,還能精確測定含共軛結構和雜原子的有紫外吸收的無色物質。常用的有紫外分光光度法、熒光分光光度法、原子吸收光譜法等。如孔燕君等利用皂苷分子上的糖基能被濃硫酸氧化脫水成糖醛衍生物的性質,建立了測定人參皂苷的分光光度法,測定波長為322nm。并用此方法測定了生藥生曬參、紅參、西洋參、三七及中中成藥雙寶素膠囊中人參皂苷的含量。在上述常規的分光光度法之外,有人采用了分光光度法與其它方法聯用的方法。如何克江等采用純化和分光光度法檢測聯用的方法,建立定量測定人參總皂苷的簡易方法。
2.3色譜法
2.3.1薄層色譜法
TLC可以使某一成分與其它成分或雜質分離,排除干擾,從而進行定性或定量分析。由于其簡便易行,并可以同時作多個樣品點的平行分析,因此得到廣泛的應用。近年來,單純的TLC法僅用來定性分析,通過同板或異板Rf值來鑒定成分,古老的目視比較法等薄層定量方法已被薄層-紫外分光光度法、薄層掃描法取代。薄層掃描法是定量分析中應用普遍、快速、準確的方法。其線性范圍、精密度、重復性和加樣回收等各項方法學研究方面均獲良好的結果。
2.3.2薄層掃描法
薄層掃描法分離效能高,所用儀器設備簡單,操作簡便并可同時作多樣品的平行分析。與比色法和分光光度法相比,其方法專屬性和穩定性都有提高,既可定性也可定量。因此薄層掃描法在藥物的鑒別和中成藥尤其是復方制劑中有效成分的分離分析方面應用廣泛。張中蘇等采用薄層掃描法測定龜齡集中人參的人參皂苷Rg1的含量。使用硅膠G薄層板,以氯仿-甲醇-水(65:35:10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑;10%硫酸乙醇溶液為顯色劑;雙波長反射法鋸齒掃描:λ=541nm,λ=700nm;狹縫0.4mm×0.4mm;靈敏度:中;線性化參數:SX=3。通過方法學考擦,點樣量在1.03-6.18μg范圍內良好的線性關系。
2.3.3高效液相色譜法
高效液相色譜法具有分離效能比薄層層析高,分析速度快,自動化程度高,靈敏度高等特點。目前用HPLC法檢測皂苷類成分的檢測器主要有紫外檢測器(UV)、蒸發光散射檢測器(ELSD)、熒光檢測器(FD)和示差拆光檢測器等。
2.3.3.1高效液相-紫外分光光度法
龐煥等利用HPLC-UV法研究了20(R)-人參皂苷Rg3人體藥代動力學。研究中主要問題是由于皂苷類化合物的結構中所含雙鍵很少或沒有,因此使用紫外檢測器時只能用末端吸收進行檢測,溶液受到流動相等各種試劑的干擾,使基線不穩,影響質量。可以通過仔細地選擇色譜條件獲得較好的結果。
2.3.3.2高效液相-蒸發光檢測法
對于一些沒有紫外吸收的樣品,通常用蒸發光散射檢測器(ELSD)與HPLC聯用檢測含量。ELSD靈敏度高,對流動相系統穩定變化不敏感,可以梯度洗脫,與UV檢測器相比擴大了HPLC的應用范圍,消除雜質和流動相的紫外吸收干擾,無需測定校正因子就可定量。近年來,對中藥桔梗、麥冬、人參、酸棗仁等以及其制劑中的皂苷成分檢測多采用該法。如李會軍等采用HPLC-ELSD法對酸棗仁中的酸棗仁皂苷A及B進行了含量測定研究,結果重現性好,可用于酸棗仁藥材的質量控制。
2.3.4.3高效液相-質譜聯用法
HPLC-MS法是近十年來發展成熟的分析技術,它集HPLC的高分離效能與串聯質譜的高靈敏度、高專屬性的優點于一體,并能夠給出被檢測組分的分子量信息。通過多級串聯質譜分析還可得到被測物質的結構信息。HyeYoungJi等建立了同時測定血漿中的人參皂苷Rb1和Rg1的LC/MS法,最低定量限能達到10ng/mL,克服了其它分析方法需加大口服劑量來遷就靈敏度的問題。
2.3.4.4反相HPLC法
彭中芳等用反相HPLC法測定西洋參蟲草中服液中人參皂苷Rb1的含量,色柱為HpersilBDS柱(200mm×4.6mm,5μm),流動相為乙腈-水(30:70),檢測波長203nm,流速1ml/min,該方法回收率為99.1%。周慶武等用反相HPLC法測定酸棗仁中酸棗仁皂苷A的含量,采用HypersilC柱為分析柱,乙腈:水(30:70,V/V)為流動相,檢測波長為204nm,流速為0.8ml/min。該法簡便、快速、重線性好,適合于酸棗仁中酸棗仁皂苷A的定量分析。
本文來源:http://www.nvnqwx.com/shiyongwen/2475001.htm