生產實習是學校為鍛煉本科生能力，讓我們能更好的與社會相適應而組織的大三本科生的生產實習活動。接到要去生產實習的通知后，我很高興，并積極聯系，終于將實習地點定在大慶油田水處理與化學研究所。這是因為：首先，水化室的主要工作是油田水處理，化學劑量開發及檢驗，和我們的專業有一定的關系;其次，我們的課程當中并未涉及到有關水生細菌的詳細知識，在這里進行生產實習可以擴展這方面的知識;我們在實驗中所學習的操作方法可以得到應用基于以上幾方面的原因，我選擇在水處理所開始我的生產實習。

　　水處理與化學研究所隸屬于大慶油田工程設計開發有限公司，原名大慶油田建設設計水處理及油田化學研究室位于黑龍江省大慶市讓胡路區油田設計院。多年來研制出原油破乳劑、油田清防蠟劑、油田防蠟劑、原油降粘劑、原油消泡劑、污水絮凝劑、防垢劑、緩蝕劑等12個系列40余種油田化學劑。

　　該所現有高中級職稱的專業人才32人，博士2人，碩士8人。XX年通過了國家級計量認證。同年與哈爾濱工業大學強強聯合，成立了哈爾濱工業大學環境科學與工程大慶研發中心。擁有研究儀器設備100多臺，其中進口設備占60%實驗室總面積為3000平方米。微生物實驗室，可進行菌種培養馴化分離。擁有國內規模裝備最為先進的三次采油實驗室，可進行各種除油及過濾工藝和設備試驗可自動合成的高壓聚合反應實驗室。

　　由于我的實習時間只有三個星期，故在劉老師的安排下對SRB做些認知性的實習，以下為我的主要實習內容

　　大致了解實驗室自XX年開始啟動的SRB抑制課題的一些工藝原理流程

　　硫酸鹽還原菌是導致大慶油田地面系統產生硫化物從而造成設備腐蝕、濾料污染等危害的根源;實驗室立足于微生物生態抑制，改變以往追求殺滅SRB數量的目的，轉而以抑制SRB活性為目的,是大慶油田系統控制SRB危害的新方法，可降低生產運行成本

　　本研究采用的折流板反應器有7個單元格，每個單元格長*寬*高=9.5cm*12cm*42cm,有效體積4.4L,單元格內裝1/3高度的活性污泥.反應器上部為排氣孔，排氣孔的導氣管伸到水封瓶液面以下，保持整個系統厭氧狀態.

　　水箱中的水通過泵泵入反應器，以推流形式流過各單元格，并從反應器流出。

　　反應器的啟動與運行

　　將含有大量的硫酸鹽還原菌的厭氧污泥，接種到反應器中;

　　現階段，反應器進水為配制的模擬水，在自來水中加入碳源、硫酸鈉、少量復合肥，用碳酸氫鈉調節堿度;濃度：COD=1800mg/L,SO42-=600mg/L左右;進水流量46L/d, 每個單元格水力停留時間=2.3hr

　　一、微生物鏡下觀察

　　G氏染色

　　步驟為：涂片→固定→結晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脫色→番紅復染→水洗→干燥→觀察。

　　涂片 與單染色法相同。

　　固定 與單染色法相同。

　　結晶紫染色 染色1分鐘，然后水洗并用吸水紙吸干。

　　碘液媒染 染色1分鐘，然后水洗并吸干。

　　酒精脫色 用95%酒精脫色，直到酒精不出現紫色時即停止，然后立即水洗，并吸干。

　　番紅復染 染色3分鐘左右，然后水洗并吸干。

　　鏡檢 在顯微鏡油鏡頭下觀察，菌體顯藍紫色的'為革蘭氏陽性菌;菌體顯紅色的為革蘭氏陰性菌。

　　SRB為革蘭氏陰性菌

　　二、厭氧型為生物的培養

　　1.SRB菌

　　采用

　　Hungate厭氧操作技術、絕跡稀釋法以及“滾管”培養對樣本進行分離，多次純化獲得純菌株SRB。

　　具體方法：向改良后Starkey培養基中加入0.2%的刃天青溶液，培養基煮沸后，加入L-半光鹽酸鹽0.5g，通入高純氮氣驅氧30min，121℃滅菌20min，固體培養基加入16%的瓊脂糖。

　　單獨配 3%的FeSO4?(NH4)2 SO4 厭氧

　　SRB菌株于液體培養基中37℃培養48h 后, 在Olympus COVER-018光學顯微鏡下革蘭氏染色觀察。

　　2.DNB菌

　　方法同

　　SRB菌，PH值最好在7，

　　藥品：

　　(NH4 ) 2SO4 3 g, KCl 0.1 g, K2HPO4 0.5 g, M gSO4?7H2O 0.5g,

　　Ca (NO3 )2 0.01 g, FeSO4?7H2O 8.0 g, 蒸餾水1 000 mL

　　121℃滅菌15 m in。

　　恒溫搖床培養箱振蕩培養

　　由于此項操作開始時間較晚，至實習結束，菌落還未完成一個完整周期的培養。

　　三、水生細菌的計數

　　1.血球板計數法

　　取樣：先清洗一個容量為100毫升的取樣瓶或燒杯。取樣前輕輕振蕩試管攪拌，待分布均勻后，立即用注射器針管取樣，取樣的量為1毫升。加蒸餾水100倍稀釋。

　　樣品放于計數板：放置前必須將血球計數板和蓋玻片清洗干凈、擦干，不能有油污染和雜質。將血球計數板平放在桌子上，蓋好蓋玻片;然后把樣品瓶輕輕搖動幾下，菌分布均勻，并立即用干凈的微吸管

　　取樣品，迅速把微細吸管放到蓋玻片的邊緣處，輕壓微細吸管的橡皮帽，使樣品流入計數板內。注意控制樣品流入量，不能過多，過多則流入到溝內;也不能過少，過少則計數時不準確，應充滿畫線方格及其周邊部分。還應注意蓋玻片下不能有氣泡存在，否則會造成計數不準確。樣品吸入血球計數板后，稍停1分鐘，待細菌沉降在玻片表面上再在顯微鏡下進行計數。

　　計數：計數中央大格的4個角的中格，每個中格有25個小格，逐一計數，4個中格相加共計數100個小格。計數時應從計數框一角開始，在計數框邊緣的標本應按"計上不計下、計左不計右"的原則，計數出細菌的總量后，按下式計算出每毫升菌液中的細菌數量：細菌數量=100個小格的細菌數×4×10000×稀釋倍數。

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