篇一：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)考試試題(完整版)

　　生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

　　二、填空題：

　　1. 測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法有(雙縮脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚試劑法（或Lowry法） )和 （考馬斯亮

　　藍(lán)G-250染色法）。

　　2. CAT能把H2O2分解為H2O和O2，其活性大小以（以一定時(shí)間內(nèi)分解的H2O2量）來表示，當(dāng)CAT

　　與H2O2反應(yīng)結(jié)束，再用 （碘量法） 測(cè)定未分解的H2O2。

　　3. 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以 （聚丙烯酰胺凝膠） 作為載體的一種區(qū)帶電泳，這種凝膠是由（Acr） 和交聯(lián)劑（Bis） 在催化劑作用下聚合而成。化學(xué)聚合法一般用來制備（分離）膠，其自由基的引發(fā)劑是（Ap），催化劑是（TEMED） ；光聚合法適于制備大孔徑的（濃縮）膠，催化劑是（核黃素） 。

　　4.層析技術(shù)按分離過程所主要依據(jù)的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分類，可分成以下幾種：（吸附層析），（分配層析 ），（離子交換層析），（凝膠層析 ）和 （親和層析） 。

　　5. 使用離心機(jī)離心樣品前，必須使離心管（等重）且對(duì)稱放入離心機(jī)。

　　6. 米氏常數(shù)可近似表示酶和底物親合力，Km愈小，表示E對(duì)S的親合力愈（大） ，Km愈大，表示E對(duì)S

　　的親合力愈（小） 。

　　7. 分光光度計(jì)在使用之前必須預(yù)熱，注意預(yù)熱及樣品槽空時(shí)必須__（打開）____（打開、合上）樣品池翻蓋。

　　8. CAT是植物體內(nèi)重要的酶促防御系統(tǒng)之一，其活性高低與植物的（抗逆性）密切相關(guān)。

　　9. 紙層析實(shí)驗(yàn)中，____________形成固定相，____________流動(dòng)相。

　　10. 聚丙烯酰胺凝膠是是由 和交聯(lián)劑 在催化劑作用下聚合而成的，在具有自

　　由基團(tuán)體系時(shí)，兩者就聚合。引發(fā)產(chǎn)生自由基的方法有兩種：（化學(xué)法）和（光聚合法）。

　　11. 層析技術(shù)按按固定相的使用形式進(jìn)行分類，可分成以下幾種：（柱層析），（紙層析），（薄層層析）和（薄

　　膜層析）。

　　參考答案：

　　生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

　　一、名詞解釋：

　　1、電泳：指帶電粒子在電場(chǎng)中向與其自身所帶電荷相反的電極方向移動(dòng)的現(xiàn)象。

　　2、同工酶：指催化同一種化學(xué)反應(yīng)，但其酶蛋白本身的分子結(jié)構(gòu)組成卻有所不同的一組酶。

　　3、分配層析法：用物質(zhì)在兩種或兩種以上不同的混合溶劑中的分配系數(shù)不同，而達(dá)到分離目的的一種實(shí)驗(yàn)方法。

　　4、酶活性：酶催化化學(xué)反應(yīng)的能力，往往以酶促反應(yīng)的初速度表示。

　　5、分光光度法：基于溶液對(duì)光吸收的大小來確定被測(cè)組份的含量的分析方法稱為分光光度法或吸光光度法。

　　6、層析技術(shù)：是利用被分離的混合物中各組分的理化性質(zhì)（分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、

　　分子親和力、分配系數(shù)等）的不同，使各組分以不同程度在流動(dòng)相和固定相中進(jìn)行分配，最終達(dá)到分離

　　目的。

　　7、比活力：即每毫克酶蛋白所含酶的活力單位數(shù)。比活力高，表示酶純度高。

　　二、填空題：

　　9. 丙烯酰胺單體（Acr），N，N’-甲叉雙丙烯酰胺（Bis）

　　1、簡(jiǎn)述4種測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法及其原理。

　　答：(1)考馬斯亮藍(lán)G-250染色法：

　　考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合蛋白質(zhì)后，形成藍(lán)色CBG-蛋白質(zhì)結(jié)合物，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)（10-1000ug/ml），CBG-蛋白質(zhì)結(jié)合物的O.D595nm值與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用分光光度法進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。

　　（2）雙縮脲法：

　　蛋白質(zhì)含有兩個(gè)以上的肽鍵（-CO-NH-）因此，有雙縮脲反應(yīng)，在堿性溶液中蛋白質(zhì)與Cu2+形成紫色絡(luò)合物，其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比，而與蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量及aa成分無關(guān)，故可以用來測(cè)定蛋白質(zhì)含量；

　　（3）Folin-酚試劑法（Lowry法）：

　　是雙縮脲法的發(fā)展，第一步涉及到堿性溶液中銅蛋白質(zhì)復(fù)合物的形成，然后這個(gè)復(fù)合物還原磷鉬酸－磷鎢酸試劑，產(chǎn)生深藍(lán)色（鉬藍(lán)和鎢藍(lán)混合物）比雙縮脲法靈敏，但費(fèi)時(shí)；

　　（4）紫外吸收法：

　　蛋白質(zhì)中一些氨基酸殘基中的苯環(huán)含有共軛雙鍵，所以蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)，最大吸收峰在280nm處，在一定范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，可用作定量測(cè)定，簡(jiǎn)單、靈敏、快速、不耗樣品，低濃度的鹽類不干擾。

　　（5）微量凱式定氮法：

　　根據(jù)蛋白質(zhì)的平均含氮量為16%，因此，測(cè)得1g蛋白氮，相當(dāng)于6.25g蛋白質(zhì)。

　　2、簡(jiǎn)述不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳中的三個(gè)不連續(xù)及三種物理效應(yīng)。

　　答：三個(gè)不連續(xù)：（1）凝膠由上下兩層凝膠組成，兩層凝膠的孔徑不同；

　　（2）緩沖液離子組成及各層凝膠的pH不同；

　　（3）在電場(chǎng)中形成不連續(xù)的電位梯度。

　　三種物理效應(yīng)：（1）電荷效應(yīng)：酶蛋白按其所帶電荷的種類及數(shù)量，在電場(chǎng)作用下向一定的電極以一定的速

　　度泳動(dòng)。

　　（2）分子篩效應(yīng)：分子量、形狀不同的分子在經(jīng)過凝膠孔徑過程中，受到的阻力不同，因此

　　移動(dòng)速率不等。

　　（3）濃縮效應(yīng)：使待分離樣品中的各組分在濃縮膠中被壓縮成層，使原來很稀的樣品得到高

　　度的濃縮。

　　3、試分析影響電泳的主要因素有哪些？

　　答：（1）帶電顆粒的大小和形狀：顆粒越大，電泳速度越慢，反之越快；

　　（2）顆粒的電荷數(shù)：電荷越少，電泳速度越慢，反之越快；

　　（3）電場(chǎng)強(qiáng)度：電場(chǎng)強(qiáng)度越小，電泳速度越慢，反之越快；

　　（4）溶液的pH值：影響被分離物質(zhì)的解離度，離等電點(diǎn)越近，電泳速度越慢，反之越快；

　　（5）溶液的粘度：粘度越大，電泳速度越慢，反之越快；

　　（6）離子強(qiáng)度：離子強(qiáng)度越大，電泳速度越慢，反之越快；

　　（7）電滲現(xiàn)象：電場(chǎng)中，液體相對(duì)于固體支持物的相對(duì)移動(dòng)；

　　（8）支持物篩孔大小，孔徑越小，電泳速度越慢，反之越快。

篇二：生化實(shí)驗(yàn)試題

　　改良Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，醋纖膜電泳及凝膠層析分離蛋白質(zhì)和SDS-PAGE三個(gè)實(shí)驗(yàn)屬于蛋白質(zhì)的內(nèi)容，琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制和檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性屬于酶的部分，觀察激素對(duì)家兔血糖濃度的影響涉及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和糖代謝章節(jié)的知識(shí)，質(zhì)粒抽提、核酸電泳及PCR屬于分子生物學(xué)的范疇。

　　一、選擇題

　　1．本學(xué)期所做的聚丙烯酰胺凝膠電泳實(shí)驗(yàn)主要用來分離（ ）

　　A．核酸B．甘油三酯 C．糖 D．蛋白質(zhì)

　　2．有關(guān)琥珀酸脫氫酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制實(shí)驗(yàn)的論述，錯(cuò)誤的是（ ）

　　A．抑制劑結(jié)構(gòu)與底物相似 B．抑制劑與酶的活性中心相結(jié)合

　　C．抑制劑與酶的結(jié)合是可逆的 D．抑制程度只與抑制劑的濃度有關(guān)

　　3．某學(xué)生用100ul可調(diào)微量移液器吸取68ul溶液，應(yīng)該將此微量移液器刻度調(diào)為（

　　A. 068.0 B. 032.0 C. 680.0 D. 006.8

　　4．用Sephadex G-50分離血紅蛋白和DNP-胰糜蛋白酶的層析方法稱( )

　　A．離子交換層析 B．凝膠層析

　　C．親和層析D．高效液相層析

　　5．在瓊脂糖凝膠電泳中，使核酸在紫外透射儀下顯色的是（ ）

　　A．氨基黑B．溴酚藍(lán) C．溴化乙錠 D．考馬斯亮藍(lán)

　　6．醋酸纖維素薄膜分離血清蛋白質(zhì)時(shí)，各血清蛋白的泳動(dòng)速率從小到大依次是（

　　A．α 1，α 2，β，albumin，γ globin B．a(chǎn)lbumin，α 1，α 2，β，γ globin

　　C．γ globin ，β，α 2，α 1，albumin D．γ globin，β，α 1，α 2，albumin

　　7．有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)曲線法的描述，錯(cuò)誤的是 （ ）

　　A．需要配制較多的標(biāo)準(zhǔn)管

　　B．待測(cè)管吸光度范圍0.05-1.0 為宜

　　））

　　C．標(biāo)準(zhǔn)管與待測(cè)管的測(cè)定應(yīng)在相同條件

　　D．所作標(biāo)準(zhǔn)曲線可供長(zhǎng)期使用

　　8．一個(gè)基本的PCR反應(yīng)體系應(yīng)該包括（）

　　A．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Mg2+，primase，dNTPS，水

　　B．模板，Taq酶，PCR Buffer，Ca2+，primers，dNTPS，去離子水

　　C．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Ca2+，primase，dNTPS，去離子水

　　D．模板，Taq酶，PCR Buffer，Mg2+，primers，dNTPS，去離子水

　　9．對(duì)蛋白質(zhì)定量的方法不包括（ ）

　　A．凱氏定氮法B．改良Lowry氏法

　　C．抽提法 D．紫外吸收

　　10．用分光光度法進(jìn)行定量分析時(shí)，基本計(jì)算公式是（ ）

　　A．待測(cè)液濃度=（標(biāo)準(zhǔn)液吸光度/待測(cè)液吸光度）×標(biāo)準(zhǔn)液濃度

　　B．待測(cè)液濃度=（待測(cè)液吸光度/標(biāo)準(zhǔn)液吸光度）×標(biāo)準(zhǔn)液濃度

　　二、填空題

　　1．制備聚丙烯酰胺凝膠時(shí)催化劑是。

　　2．PCR可在體外對(duì)目的基因進(jìn)行高效、快速、特異的擴(kuò)增，它的每個(gè)循環(huán)包括三個(gè)步驟，分別是變性___、___退火____、__延伸___。

　　3．琥珀酸脫氫酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制過程中，加入液體石蠟的作用是實(shí)驗(yàn)中使用的抑制劑是丙二酸 。

　　4．ALT或GPT縮寫代表，催化的反應(yīng)是 。血清中ALT（GPT）活性單位的定義是：每毫升血清在pH7.4，37℃保溫條件下與底物作用30min后，每生成_2.5_μg的丙酮酸為1個(gè)谷-丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位。

　　5． 分光光度計(jì)使用完畢時(shí)，為了延長(zhǎng)儀器的使用壽命，滑桿應(yīng)該放在光源對(duì)準(zhǔn)_1檔和2檔交界處______休息態(tài)__的位置。

　　6．PCR總反應(yīng)體系的體積是50μl，其中10×buffer加量應(yīng)為_5__μl。

　　7．酵母核酸定量中，總磷管需要進(jìn)行反應(yīng)，將有機(jī)磷轉(zhuǎn)變?yōu)樾枰玫闹匾噭┦?，試劑酒精燈加熱反應(yīng)過程經(jīng)歷顏色變化為 。

　　8．用離心機(jī)離心前，必須將裝有樣品的離心管_配平_______，并_____對(duì)稱______放置于離

　　心機(jī)的離心平臺(tái)上，然后蓋好上蓋，才能開啟電源。

　　9．激素對(duì)家兔血糖濃度的影響實(shí)驗(yàn)中，升高血糖的激素是 腎上腺素，降低血糖的激素是 胰島素 。

　　三、判斷題

　　1. 蛋白質(zhì)在小于等電點(diǎn)的pH溶液中，帶負(fù)電，電泳時(shí)向正極移動(dòng)。（ F ）

　　2. Lambert-Beer定律公式為A=KcL，其中K為消光系數(shù)，表示物質(zhì)對(duì)光線吸收的能力。（T）

　　3. 酵母核酸提取實(shí)驗(yàn)中，甲苯的作用是使蛋白質(zhì)變性。（）

　　4. 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）必需明確待擴(kuò)增基因片段的全部序列。（ ）

　　5. 瓊脂糖電泳分離核酸時(shí)（pH7.4），核酸樣品應(yīng)點(diǎn)在負(fù)極端。（ T）

　　6. 血糖測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，兔血經(jīng)加抗凝劑離心后所得到的上清液是血清。（ F ）

　　四、簡(jiǎn)答題

　　1．簡(jiǎn)要敘述分光光度計(jì)使用方法。

　　開機(jī)，調(diào)至要使用的波長(zhǎng)，預(yù)熱20min

　　將待比溶液倒至比色杯中，高度為2/3-4/5，手拿毛面，朝向自己，放入樣品室

　　調(diào)至T檔，拉桿拉至0檔（空白管），調(diào)節(jié)T=100%

　　拉桿拉至1檔，調(diào)節(jié)T=0

　　調(diào)至A檔，拉桿拉至2,3。。。檔，讀取標(biāo)準(zhǔn)液、待測(cè)液的吸光度

　　取出后關(guān)機(jī)

　　2. 簡(jiǎn)述改良Mohum法測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶GPT活性實(shí)驗(yàn)中對(duì)照管的作用？

　　五、實(shí)驗(yàn)計(jì)算題

　　1. 采用鄰甲苯胺法測(cè)定血糖濃度。

　　葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（0.4 mg/ml）取0.5ml，待測(cè)血漿取0.1ml。

　　鄰甲苯胺顯色（反應(yīng)總體積均為7ml）后，620nm波長(zhǎng)比色，以空白管調(diào)零后讀得：A標(biāo) = 0.400；A測(cè) = 0.220

　　請(qǐng)按照上述條件采用標(biāo)準(zhǔn)管法計(jì)算待測(cè)血漿中血糖的濃度（以mg/100ml為單位）。 C=(0.220/0.1)/(0.400/0.5)*0.4*100=110