篇一：生物化學實驗考試試題(完整版)

　　生物化學實驗

　　二、填空題：

　　1. 測定蛋白質含量的方法有(雙縮脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚試劑法（或Lowry法） )和 （考馬斯亮

　　藍G-250染色法）。

　　2. CAT能把H2O2分解為H2O和O2，其活性大小以（以一定時間內分解的H2O2量）來表示，當CAT

　　與H2O2反應結束，再用 （碘量法） 測定未分解的H2O2。

　　3. 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以 （聚丙烯酰胺凝膠） 作為載體的一種區帶電泳，這種凝膠是由（Acr） 和交聯劑（Bis） 在催化劑作用下聚合而成。化學聚合法一般用來制備（分離）膠，其自由基的引發劑是（Ap），催化劑是（TEMED） ；光聚合法適于制備大孔徑的（濃縮）膠，催化劑是（核黃素） 。

　　4.層析技術按分離過程所主要依據的物理化學性質進行分類，可分成以下幾種：（吸附層析），（分配層析 ），（離子交換層析），（凝膠層析 ）和 （親和層析） 。

　　5. 使用離心機離心樣品前，必須使離心管（等重）且對稱放入離心機。

　　6. 米氏常數可近似表示酶和底物親合力，Km愈小，表示E對S的親合力愈（大） ，Km愈大，表示E對S

　　的親合力愈（小） 。

　　7. 分光光度計在使用之前必須預熱，注意預熱及樣品槽空時必須__（打開）____（打開、合上）樣品池翻蓋。

　　8. CAT是植物體內重要的酶促防御系統之一，其活性高低與植物的（抗逆性）密切相關。

　　9. 紙層析實驗中，____________形成固定相，____________流動相。

　　10. 聚丙烯酰胺凝膠是是由 和交聯劑 在催化劑作用下聚合而成的，在具有自

　　由基團體系時，兩者就聚合。引發產生自由基的方法有兩種：（化學法）和（光聚合法）。

　　11. 層析技術按按固定相的使用形式進行分類，可分成以下幾種：（柱層析），（紙層析），（薄層層析）和（薄

　　膜層析）。

　　參考答案：

　　生物化學實驗

　　一、名詞解釋：

　　1、電泳：指帶電粒子在電場中向與其自身所帶電荷相反的電極方向移動的現象。

　　2、同工酶：指催化同一種化學反應，但其酶蛋白本身的分子結構組成卻有所不同的一組酶。

　　3、分配層析法：用物質在兩種或兩種以上不同的混合溶劑中的分配系數不同，而達到分離目的的一種實驗方法。

　　4、酶活性：酶催化化學反應的能力，往往以酶促反應的初速度表示。

　　5、分光光度法：基于溶液對光吸收的大小來確定被測組份的含量的分析方法稱為分光光度法或吸光光度法。

　　6、層析技術：是利用被分離的混合物中各組分的理化性質（分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、

　　分子親和力、分配系數等）的不同，使各組分以不同程度在流動相和固定相中進行分配，最終達到分離

　　目的。

　　7、比活力：即每毫克酶蛋白所含酶的活力單位數。比活力高，表示酶純度高。

　　二、填空題：

　　9. 丙烯酰胺單體（Acr），N，N’-甲叉雙丙烯酰胺（Bis）

　　1、簡述4種測定蛋白質含量的方法及其原理。

　　答：(1)考馬斯亮藍G-250染色法：

　　考馬斯亮藍G-250結合蛋白質后，形成藍色CBG-蛋白質結合物，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白質濃度范圍內（10-1000ug/ml），CBG-蛋白質結合物的O.D595nm值與蛋白質含量成正比，故可用分光光度法進行蛋白質的定量測定。

　　（2）雙縮脲法：

　　蛋白質含有兩個以上的肽鍵（-CO-NH-）因此，有雙縮脲反應，在堿性溶液中蛋白質與Cu2+形成紫色絡合物，其顏色深淺與蛋白質含量成正比，而與蛋白質的相對分子質量及aa成分無關，故可以用來測定蛋白質含量；

　　（3）Folin-酚試劑法（Lowry法）：

　　是雙縮脲法的發展，第一步涉及到堿性溶液中銅蛋白質復合物的形成，然后這個復合物還原磷鉬酸－磷鎢酸試劑，產生深藍色（鉬藍和鎢藍混合物）比雙縮脲法靈敏，但費時；

　　（4）紫外吸收法：

　　蛋白質中一些氨基酸殘基中的苯環含有共軛雙鍵，所以蛋白質具有吸收紫外光的性質，最大吸收峰在280nm處，在一定范圍內，蛋白質溶液的光吸收值與蛋白質含量成正比，可用作定量測定，簡單、靈敏、快速、不耗樣品，低濃度的鹽類不干擾。

　　（5）微量凱式定氮法：

　　根據蛋白質的平均含氮量為16%，因此，測得1g蛋白氮，相當于6.25g蛋白質。

　　2、簡述不連續聚丙烯酰胺凝膠電泳中的三個不連續及三種物理效應。

　　答：三個不連續：（1）凝膠由上下兩層凝膠組成，兩層凝膠的孔徑不同；

　　（2）緩沖液離子組成及各層凝膠的pH不同；

　　（3）在電場中形成不連續的電位梯度。

　　三種物理效應：（1）電荷效應：酶蛋白按其所帶電荷的種類及數量，在電場作用下向一定的電極以一定的速

　　度泳動。

　　（2）分子篩效應：分子量、形狀不同的分子在經過凝膠孔徑過程中，受到的阻力不同，因此

　　移動速率不等。

　　（3）濃縮效應：使待分離樣品中的各組分在濃縮膠中被壓縮成層，使原來很稀的樣品得到高

　　度的濃縮。

　　3、試分析影響電泳的主要因素有哪些？

　　答：（1）帶電顆粒的大小和形狀：顆粒越大，電泳速度越慢，反之越快；

　　（2）顆粒的電荷數：電荷越少，電泳速度越慢，反之越快；

　　（3）電場強度：電場強度越小，電泳速度越慢，反之越快；

　　（4）溶液的pH值：影響被分離物質的解離度，離等電點越近，電泳速度越慢，反之越快；

　　（5）溶液的粘度：粘度越大，電泳速度越慢，反之越快；

　　（6）離子強度：離子強度越大，電泳速度越慢，反之越快；

　　（7）電滲現象：電場中，液體相對于固體支持物的相對移動；

　　（8）支持物篩孔大小，孔徑越小，電泳速度越慢，反之越快。

篇二：生化實驗試題

　　改良Lowry氏法測定蛋白質含量，醋纖膜電泳及凝膠層析分離蛋白質和SDS-PAGE三個實驗屬于蛋白質的內容，琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制和檢測谷丙轉氨酶活性屬于酶的部分，觀察激素對家兔血糖濃度的影響涉及信號轉導和糖代謝章節的知識，質粒抽提、核酸電泳及PCR屬于分子生物學的范疇。

　　一、選擇題

　　1．本學期所做的聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗主要用來分離（ ）

　　A．核酸B．甘油三酯 C．糖 D．蛋白質

　　2．有關琥珀酸脫氫酶競爭性抑制實驗的論述，錯誤的是（ ）

　　A．抑制劑結構與底物相似 B．抑制劑與酶的活性中心相結合

　　C．抑制劑與酶的結合是可逆的 D．抑制程度只與抑制劑的濃度有關

　　3．某學生用100ul可調微量移液器吸取68ul溶液，應該將此微量移液器刻度調為（

　　A. 068.0 B. 032.0 C. 680.0 D. 006.8

　　4．用Sephadex G-50分離血紅蛋白和DNP-胰糜蛋白酶的層析方法稱( )

　　A．離子交換層析 B．凝膠層析

　　C．親和層析D．高效液相層析

　　5．在瓊脂糖凝膠電泳中，使核酸在紫外透射儀下顯色的是（ ）

　　A．氨基黑B．溴酚藍 C．溴化乙錠 D．考馬斯亮藍

　　6．醋酸纖維素薄膜分離血清蛋白質時，各血清蛋白的泳動速率從小到大依次是（

　　A．α 1，α 2，β，albumin，γ globin B．albumin，α 1，α 2，β，γ globin

　　C．γ globin ，β，α 2，α 1，albumin D．γ globin，β，α 1，α 2，albumin

　　7．有關標準曲線法的描述，錯誤的是 （ ）

　　A．需要配制較多的標準管

　　B．待測管吸光度范圍0.05-1.0 為宜

　　））

　　C．標準管與待測管的測定應在相同條件

　　D．所作標準曲線可供長期使用

　　8．一個基本的PCR反應體系應該包括（）

　　A．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Mg2+，primase，dNTPS，水

　　B．模板，Taq酶，PCR Buffer，Ca2+，primers，dNTPS，去離子水

　　C．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Ca2+，primase，dNTPS，去離子水

　　D．模板，Taq酶，PCR Buffer，Mg2+，primers，dNTPS，去離子水

　　9．對蛋白質定量的方法不包括（ ）

　　A．凱氏定氮法B．改良Lowry氏法

　　C．抽提法 D．紫外吸收

　　10．用分光光度法進行定量分析時，基本計算公式是（ ）

　　A．待測液濃度=（標準液吸光度/待測液吸光度）×標準液濃度

　　B．待測液濃度=（待測液吸光度/標準液吸光度）×標準液濃度

　　二、填空題

　　1．制備聚丙烯酰胺凝膠時催化劑是。

　　2．PCR可在體外對目的基因進行高效、快速、特異的擴增，它的每個循環包括三個步驟，分別是變性___、___退火____、__延伸___。

　　3．琥珀酸脫氫酶競爭性抑制過程中，加入液體石蠟的作用是實驗中使用的抑制劑是丙二酸 。

　　4．ALT或GPT縮寫代表，催化的反應是 。血清中ALT（GPT）活性單位的定義是：每毫升血清在pH7.4，37℃保溫條件下與底物作用30min后，每生成_2.5_μg的丙酮酸為1個谷-丙轉氨酶活性單位。

　　5． 分光光度計使用完畢時，為了延長儀器的使用壽命，滑桿應該放在光源對準_1檔和2檔交界處______休息態__的位置。

　　6．PCR總反應體系的體積是50μl，其中10×buffer加量應為_5__μl。

　　7．酵母核酸定量中，總磷管需要進行反應，將有機磷轉變為需要用的重要試劑是 ，試劑酒精燈加熱反應過程經歷顏色變化為 。

　　8．用離心機離心前，必須將裝有樣品的離心管_配平_______，并_____對稱______放置于離

　　心機的離心平臺上，然后蓋好上蓋，才能開啟電源。

　　9．激素對家兔血糖濃度的影響實驗中，升高血糖的激素是 腎上腺素，降低血糖的激素是 胰島素 。

　　三、判斷題

　　1. 蛋白質在小于等電點的pH溶液中，帶負電，電泳時向正極移動。（ F ）

　　2. Lambert-Beer定律公式為A=KcL，其中K為消光系數，表示物質對光線吸收的能力。（T）

　　3. 酵母核酸提取實驗中，甲苯的作用是使蛋白質變性。（）

　　4. 聚合酶鏈式反應（PCR）必需明確待擴增基因片段的全部序列。（ ）

　　5. 瓊脂糖電泳分離核酸時（pH7.4），核酸樣品應點在負極端。（ T）

　　6. 血糖測定實驗中，兔血經加抗凝劑離心后所得到的上清液是血清。（ F ）

　　四、簡答題

　　1．簡要敘述分光光度計使用方法。

　　開機，調至要使用的波長，預熱20min

　　將待比溶液倒至比色杯中，高度為2/3-4/5，手拿毛面，朝向自己，放入樣品室

　　調至T檔，拉桿拉至0檔（空白管），調節T=100%

　　拉桿拉至1檔，調節T=0

　　調至A檔，拉桿拉至2,3。。。檔，讀取標準液、待測液的吸光度

　　取出后關機

　　2. 簡述改良Mohum法測定谷丙轉氨酶GPT活性實驗中對照管的作用？

　　五、實驗計算題

　　1. 采用鄰甲苯胺法測定血糖濃度。

　　葡萄糖標準液（0.4 mg/ml）取0.5ml，待測血漿取0.1ml。

　　鄰甲苯胺顯色（反應總體積均為7ml）后，620nm波長比色，以空白管調零后讀得：A標 = 0.400；A測 = 0.220

　　請按照上述條件采用標準管法計算待測血漿中血糖的濃度（以mg/100ml為單位）。 C=(0.220/0.1)/(0.400/0.5)*0.4*100=110