發(fā)酵現(xiàn)象實驗報告范文

　　篇一：發(fā)酵現(xiàn)象(初中生物實驗)

　　創(chuàng)新實驗?zāi)康模?/strong>

　　探究酵母菌在無氧條件下發(fā)酵作用產(chǎn)生二氧化碳和酒精。

　　實驗儀器及用品：

　　1.實驗儀器：帶膠塞和膠管的錐形瓶、小氣球、Y形管、大燒杯、溫度計、試管、比色板、小燒杯、玻璃棒。

　　2.實驗用品:  白糖（100g）、一小包干酵母（約30g）、澄清的石灰水、酒精、橙色的重鉻酸鉀溶液。（檢測酒精的試劑。0.5ml的濃硫酸溶有0.1g重鉻酸鉀，體積分?jǐn)?shù)為95％—97％，在酸性條件下與酒精發(fā)生化學(xué)反應(yīng)由橙色變?yōu)榛揖G色）

　　實驗裝置及說明：

　　澄清的石灰水可以檢測氣體中有二氧化碳，重鉻酸鉀溶液遇到酒精由橙色變?yōu)榛揖G色。 實驗操作：

　　1.將（100ml）40℃溫水倒入錐形瓶，再用湯匙將一大勺糖及適量干酵母加進(jìn)來，攪拌均勻后，將錐形瓶放在大燒杯中水浴保溫溫度保持在30—40 ℃左右。（先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，是酵母菌迅速繁殖，并把葡萄糖分解成二氧化碳和水。）

　　2. 觀察到酵母菌培養(yǎng)液有氣泡產(chǎn)生，塞上橡膠塞（這樣做既可以避免氣體散失，影響后面實驗效果，也為酒精的產(chǎn)生提供保障）。過一段時間后就可看到干癟的氣球慢慢膨脹起來了。（酵母菌的無氧呼吸）

　　3.將夾子打開，擠壓氣球，使瓶內(nèi)產(chǎn)生的氣體徐徐通過膠管導(dǎo)入試管內(nèi)的澄清石灰水中，石灰水變渾濁了(檢測氣體中有二氧化碳。原理：二氧化碳遇石灰水，石灰水變渾濁)。

　　4.將重鉻酸鉀試劑分別滴在比色板的凹槽內(nèi)，并分別標(biāo)注1號、2號（作對照）、3號。在3號試劑上滴1滴酒精，在1號試劑上滴1滴酵母菌發(fā)酵液。發(fā)現(xiàn)1號和3號都由橙色變成了灰綠色。

　　實驗創(chuàng)新點及意義：

　　通過上述實驗，讓我們對酵母菌“發(fā)酵現(xiàn)象”所需要的原料、

　　條件及產(chǎn)生的物質(zhì)都有了較直觀的感受，比較容易理解課本上闡述的 “酵母菌可以把葡萄糖轉(zhuǎn)化為酒精和二氧化碳”等有關(guān)內(nèi)容，而且印象深刻。使我們養(yǎng)成很好的節(jié)約意識。

　　實驗現(xiàn)象：

　　1. 聞到了發(fā)酵后特殊的甜酒的芳香氣味。

　　2. 詳見【實驗操作4】

　　3. 澄清的石灰水變渾濁

　　篇二：發(fā)酵實驗報告

　　實驗一 搖瓶發(fā)酵法制備糖化酶

　　一、實驗?zāi)康?/strong>

　　（1）掌握搖床發(fā)酵法制備糖化酶的工藝流程及操作方法

　　（2）了解利用黑曲霉菌菌種發(fā)酵時的生長條件及注意事項

　　（3）熟練掌握實驗過程中的無菌操作和培養(yǎng)條件的選擇

　　二、實驗儀器及試劑

　　菌種：黑曲霉

　　儀器：錐形瓶（500ml)、移液管、恒溫水浴鍋、秒表、50mL比色管、牛皮紙、紗布（8層）、pH計。

　　藥品：三水乙酸鈉、冰醋酸、硫代硫酸鈉、碘、氫氧化鈉、硫酸、可溶性淀粉、玉米粉、豆餅粉、麩皮

　　三、實驗原理

　　搖瓶發(fā)酵是實驗室常用的通風(fēng)發(fā)酵方法，通過將裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)，以滿足微生物生長、繁殖及產(chǎn)生許多代謝產(chǎn)物對氧的需求。它是實驗室篩選好氣性菌種，以及摸索種子培養(yǎng)工藝與發(fā)酵工藝的常用方法。

　　葡萄糖淀粉酶（EC3.2.1.3）系統(tǒng)名為淀粉α-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶，俗稱糖化酶，是國內(nèi)產(chǎn)量最大的.酶品種。糖化酶對淀粉分子的作用是從非還原末端切開α-1,4鍵，也能切開α-1,3鍵和α-1,6鍵，產(chǎn)生葡萄糖。

　　糖化酶有催化淀粉水解的作用，能從淀粉分子非還原末端開始，分解α-1,4-葡萄糖苷鍵生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸鈉氧化，過量的次碘酸鈉酸化后析出碘，再用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，計算酶活力。

　　四、實驗步驟

　　1.培養(yǎng)步驟

　　1.1種子培養(yǎng)基制備及滅菌

　　將新鮮土豆去皮切塊，稱取200~300 g土豆塊放入500 mL燒杯中，加入一定量水，在電爐上煮沸至土豆塊熟透，用120目紗布過濾，濾渣反復(fù)用一定量水清洗、過濾2次，合并各次濾液且定容至1000 mL即得土豆汁。取一定體積的土豆汁，在其中加入5%的蔗糖，溶解搖勻并調(diào)pH至5.5，即得種子培養(yǎng)基。將適量種子培養(yǎng)基倒入錐形瓶（250ml），用紗布塞塞住管口，并用牛皮紙包扎，置滅菌鍋中，于121℃下滅菌30min。待滅菌完畢，冷卻取出。

　　1.2發(fā)酵培養(yǎng)基制備及滅菌

　　取6只500mL搖瓶，分別按裝液量100、200、300mL配制培養(yǎng)基（玉米粉6%、豆餅粉2%、麩皮1%），加水后稍微搖動，使原料濕潤，浸入水中。用8層紗布包扎瓶口，再加牛皮紙包扎。置滅菌鍋中，于121℃下滅菌30min。

　　1.3發(fā)酵培養(yǎng)基接種：將已生長好的菌種，在無菌條件下，按照10%的接 量（8%-12%）接種到發(fā)酵培養(yǎng)基上。

　　1.4發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵：將搖瓶固定在搖床上，培養(yǎng)溫度為31℃，轉(zhuǎn)速為120r/min，培養(yǎng)時間96h。顯微鏡觀察菌絲形態(tài)，用試紙測發(fā)酵液pH，測定酶活力。搖瓶培養(yǎng)時觀察各種搖瓶機(jī)的結(jié)構(gòu)。

　　2.糖化酶活力測定

　　2.1待測酶液的制備：

　　精確吸取液體酶1.00mL，先用少量的乙酸緩沖液溶解，并用玻璃棒搗研，將上清液小心傾入容量瓶中。沉渣部分再加入少量緩沖液，最后全部移入容量瓶中，用緩沖液定容至刻度（估計酶活力在100~250u/mL范圍內(nèi)），搖勻。通過4層紗布過濾，濾液供測定用。

　　2.2酶活力測定：

　　于甲、乙兩支50mL比色管中，分別加入可溶性淀粉溶液25mL及緩沖液5mL，搖勻后，于40℃恒溫水浴中預(yù)熱5min。在甲管（樣品）中加入待測酶液2mL，立刻搖勻，在此溫度下準(zhǔn)確反應(yīng)30min，立刻各加入氫氧化鈉溶液0.2mL，搖勻，將兩管取出迅速冷卻，并于乙管（空白）中補加待測酶液2mL。吸取上述反應(yīng)液與空白液各5mL，分別置于碘量瓶中，準(zhǔn)確加入碘溶液10mL，再加氫氧化鈉溶液15mL，搖勻塞緊，于暗處反應(yīng)15min。取出，加硫酸溶液2mL，立即用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液滴定，直至藍(lán)色剛好消失為其終點。

　　2.3酶活力計算：

　　樣品酶活力（u/g或u/mL）=579.9×(A-B)c×n式中：A與B分別為空白、樣品消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；c為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；n為稀釋倍數(shù)。

　　五、數(shù)據(jù)分析

　　比較不同裝液量下的菌體形態(tài)特征、酶活力，將結(jié)果填入下表：

　　裝液量/mL

　　指標(biāo)

　　酶活力

　　pH

　　菌體特征 100 420u/mL 4.2 200 510u/mL 4.1 300 570u/mL 3.8 出現(xiàn)球狀的白色的菌絲團(tuán)，瓶壁上出現(xiàn)黑絲的孢子和菌絲

　　六、 結(jié)論

　　1.不同的裝液量對酶活力的影響是隨著裝液量的增加呈現(xiàn)上升的趨勢，但是酶活力變化不大，并且酶活力不高，與其他組數(shù)據(jù)相比接種量跟酶活力關(guān)

　　2.菌體特征在錐形瓶的瓶壁上出現(xiàn)白色的菌絲，在培養(yǎng)基中也出現(xiàn)了絲球

　　3.菌種新陳代謝的旺盛二氧化碳的釋放增加，使pH值逐漸下降，最終使培養(yǎng)基的pH下降至3.8左右。

　　實驗二 釀酒酵母發(fā)酵過程參數(shù)的測定及計算

　　一、實驗?zāi)康?/strong>

　　1.測定并繪制生長曲線、底物消耗曲線和產(chǎn)物形成曲線

　　2.了解發(fā)酵過程中葡萄糖的利用、菌體生長和產(chǎn)物生成的相互關(guān)系

　　3.初步學(xué)會菌體生長、底物消耗和產(chǎn)物生成有關(guān)發(fā)酵參數(shù)的求解

　　二、實驗儀器及試劑

　　菌種：釀酒酵母

　　儀器：錐形瓶（250ml）、移液管、pH計、生物傳感儀、分析天平

　　藥品：酵母膏、胰蛋白胨、葡萄糖、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、苯甲酸鈉、EDTA鈉、氯化鈉

　　三、實驗原理

　　酵母菌是兼性厭氧型真菌，喜歡含糖的環(huán)境， 有氧時將葡萄糖分解成CO和水，無氧時將葡萄糖分解成酒精和二氧化碳，同時都釋放出能量

　　生物傳感器由生物識別元件和信號轉(zhuǎn)換器組成，能夠選擇性地對樣品中的待測物發(fā)出相應(yīng)，通過生物識別系統(tǒng)和電化學(xué)或其他傳感器把待測物質(zhì)的濃度轉(zhuǎn)為電信號，根據(jù)電信號的大小定量測出待測物質(zhì)的濃度。生物傳感器是應(yīng)用生物活性材料（如酶、蛋白質(zhì)、DNA、抗體、抗原、生物膜等）與物理或化學(xué)換能器有機(jī)結(jié)合的一門交叉學(xué)科，是發(fā)展生物技術(shù)必不可少的一種先進(jìn)的檢測方法與監(jiān)控方法，也是物質(zhì)在分子水平的快速、微量分析方法

　　四、 實驗步驟

　　1.種子培養(yǎng)基（YEPD，g/L）：稱取酵母膏10g、胰蛋白胨20g、葡萄糖20g，加蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH 5.0左右，并定容至1000ml。

　　2.發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L）：稱取酵母膏10g，胰蛋白胨20g，葡萄糖100g加蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH 至5.0左右，定容至1000ml，分裝10個錐形瓶（250ml）封口121℃，30min滅菌。

　　3.種子培養(yǎng)：將活化好的種子培養(yǎng)液，用移液管移去10ml接種于滅菌YEPD液體培養(yǎng)基中， 于30℃、120 r/min全溫?fù)u瓶柜中培養(yǎng)24 h左右，觀察種子液的色澤、氣味與形態(tài)等基本情況。

　　4.發(fā)酵方法：將培養(yǎng)好的種子液按8-12%的接種比例，接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于30 ℃、120 r/min全溫?fù)u瓶柜中培養(yǎng)96 h。

　　5.過程取樣：發(fā)酵培養(yǎng)基接種發(fā)酵后，每隔8小時取樣，移取45ml菌液至離心試管中3800r/min離心，上清液取出分析，菌泥放置烘箱烘干，分析菌體生物量、殘余葡萄糖濃度與酒精生成量，并以此為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)計算參數(shù)

　　6.生物量的測定：取等量的兩份發(fā)酵液，一份由烘干法測得菌體干重（DCW），另一份稀釋成一定的濃度于630 nm下測定吸光值（OD值），得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為DCW=3.87×OD（R=0.996）。再以相同方法測得樣品的OD值，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出菌體干重。

　　7.還原糖的測定與乙醇的測定：使用生物傳感儀測定糖類和酒精的含量

　　五、 數(shù)據(jù)分析

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